酵母分泌表达原理-酵母表达系统-真核表达系统-瑞源生物
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2021-10-09 16:46:26
未经作者授权，禁止转载欲进行毕赤酵母表达一个真核蛋白，实验方案如下：
合成基因：两端采用EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点双酶切连接进入pPIC9K中。
提取pPIC9K-目的基因，SaLⅠ线性化后电转化进入GS115，YPDA+G418平板筛选。
将YPDA+G418平板的菌落进行过夜培养，粗提取基因组，进行基因组PCR（5‘AOX/3’AOX）鉴定阳性菌落。
将鉴定的阳性克隆，挑取在YPG培养基中过夜，收集菌体，转入BMMY中进行诱导表达，取不同时间点的上清和菌体进行SDS-PAGE，查看是否能够诱导表达成功。
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