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以human p53为例进行引物设计。
1、寻找基因序列
网站https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/?term=
选择核苷酸数据库，在检索框输入基因+物种+mRNA，点击search。
左侧类别下，选择 mRNA。
以下条目就是我们要找的p53 human mRNA。
单击选择FASTA序列格式。
在右侧的序列分析工具栏，点击“pick primers”即可跳转到Primer-BLAST页面。
2、参数设置
选择PCR模板区；
输入FASTA格式的序列或Accession Number，或者点击“选择文件”载入；
可设置正向引物和反向引物的起始和终止位置；
选择引物参数区；
若你自己设计好了引物，可在此输入引物验证引物好坏；
可输入PCR产物的大小和Tm值参数。
内含子/外显子选择区：框内可选择引物设计是否跨越内含子。
引物特异性验证区：六种数据库可供选择，推荐使用“Refseq representative genomes”数据库，用户也可使用自己的序列作为搜索数据库。
3、引物序列输出
引物的可视化结果，可以显示所有引物的起始和终止位置，基因的CDS区，外显子的位置等。
Self complementarity值越小越好。
根据引物设计原则选择最佳引物序列，示例中的最佳引物序列为Primer pair 3，把引物复制下来即可。
引物设计教程汇总
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