研究膜蛋白的宝贵工具——去垢剂-伊诺凯
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2022年05月25日 17:38

去垢剂也称为表面活性剂,是两亲性分子,即具有亲水基又具有疏水基。可使蛋白质变性。

去垢剂广泛应用于生物化学、细胞生物学、分子生物学等领域。其特殊结构可以破坏细胞双层脂质膜,从而释放和溶解膜蛋白。一些去垢剂可用于溶解重组蛋白,而另一些则被用于蛋白质的稳定、结晶和变性。去垢剂可以在水/非水界面处排列,从而降低表面张力,增加混溶性并稳定乳状液。此外去垢剂应用在:

提取DNA和RNA

溶解标本用于诊断应用

细胞裂解

脂质体制备

防止溶液中的试剂和被分析物沉淀

防止免疫测定中的非特异性结合

膜裂解原理

蛋白质通过脂质尾部和疏水蛋白结构域之间的疏水相互作用而保持在脂质双分子层中。这些整合膜蛋白(IMPs)不溶于水溶液,呈聚集状态,保护其疏水结构域,但可以溶于去垢剂,去垢剂形成的胶束类似于生物膜的双层膜。蛋白质通过疏水相互作用被纳入这些胶束中。通常嵌在膜脂双分子层中的膜蛋白的疏水区被一层去垢剂分子包围,而亲水区域暴露在水介质中。待完全去除去垢剂,疏水区域聚集,导致膜蛋白的沉淀。去垢剂应用在细胞裂解和蛋白抽提中,是研究膜蛋白的宝贵工具。

生物膜的流体镶嵌模型

图片来源于网络

参考文献

1.Annela M. S., Paul C. , Paula J. B. Membrane Proteins, Lipids and Detergents: not Just a Soap Opera. BBA.-BSiomembrane. 1666 (2004) 105 - 117.

2.R. Michael G., Shelagh F.M. Detergents as Tools in Membrane Biochemistry*. J. Biol. Chem.32403 - 32406, 2001.

去垢剂类型

1

离子型去垢剂

Ionic detergent

通常是含有阴离子或阳离子头部基团及一个净电荷,疏水尾部由十二烷基硫酸钠(SDS)或十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)等直链烃组成,对溶解膜蛋白非常有效。但可能导致蛋白自变性。

十二烷基硫酸钠(SDS)

CAS:151-21-3

货号:B38483

十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)

CAS:57-09-0

货号:B76720

2

胆汁酸及盐类

Bile acid salts

胆汁酸盐也属于离子型去污剂,但结构与SDS不同,主链由刚性甾体基团组成,相对温和,用于膜受体和其他质膜蛋白的提取以及用于细胞核的分离。这类分子的平面结构使其具有一个极性面和一个非极性面,因此,其CMC较高,胶束较小,易于通过透析去除。

X=H, R=O-Na+,脱氧胆酸钠

CAS:302-95-4

货号:A87418

X=OH, R=O-Na+,胆酸钠

CAS:361-09-1

货号:A63173

3

非离子型去垢剂

Nonionic detergents

非离子洗涤剂含有聚氧乙烯或糖苷基的不带电亲水头基团,常用于溶解和分离膜蛋白,可提高2D凝胶中蛋白质的分离度。

n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷

CAS:29836-26-8

货号:A90792

十二烷基-β-D-麦芽糖苷

CAS:69227-93-6

货号:A79344

Triton X-100具有溶血作用,可用于DNA提取。此外还应用于:

细胞通透化处理用于免疫荧光染色

western blot分析中裂解缓冲液中的一种成分

制备免疫金标记的细胞切片用于电子显微镜的Tris盐缓冲液中的一种成分。

X=9,曲拉通X-100(Triton X-100)

CAS:9002-93-1

货号:A29392

X=7-8,曲拉通X-114(Triton X-114)

CAS:9036-19-5

货号:A71745

4

两性离子去垢剂

Zwitterionic detergents

CHAPS及衍生物用于溶解膜蛋白,稳定各种蛋白质-DNA复合物,并可以保留溶液中蛋白质的生化活性。

X=H,3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)

CAS:75621-03-3

货号:A69674

X=OH,3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-2-羟基-1-丙磺酸(CHAPSO)

CAS:82473-24-3

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