免疫印迹实验（蛋白质印迹法）即 Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，主要流程为先对样品进行SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白样品，再将分离出的蛋白转移至印迹膜上，通过封闭，避免产生非特异性结合的条带，最后通过多种方法进行蛋白检测，比如ECL化学发光等方法。该方法用途较多，能对蛋白进行定性和半定量的分析。

Western Blot实验流程：

蛋白提取—蛋白定量—上样电泳—转膜—封闭—孵育一抗—孵育二抗—显影检测 WB显影时蛋白信号弱或者无信号通常由以下因素造成： ①蛋白提取质量差 尽量保证使用新鲜样本或者组织，冰冻样本避免反复冻融，提取样本过程在冰上操作，加入蛋白酶抑制剂。 ②蛋白上样量低 增加上样量，每泳道蛋白上样量不低于20-30μg,设置阳性对照。 ③转膜不完全 确定转膜效率、保证胶与膜充分结合、保证电极正确装配、控制转膜温度（冰袋降温）、优化转膜电流及时间。可使用可逆性染色丽春红S检测转膜结果。 ④膜选择错误 选择合适膜的孔径：>22kD的蛋白选用0.45μm孔径，<22kD蛋白选用0.22μm孔径。 ⑤一抗二抗使用不匹配 一抗要选择对应种属，抗体在保质期内，二抗和一抗要使匹配，属于同一宿主。 ⑥抗体孵育时间太短 增加孵育抗体时间，可以4℃过夜孵育。 ⑦　洗膜过度 ⑧检测试剂盒失效