我们在获得一个新的基因后，尝试对其设计引物，倘若发现这个基因的引物很难设计，可以尝试在Primerbank网站中搜索，看看前人是否设计过，如果有合适的直接拿来用也未尝不可，但是在使用之前请先做一个Blast验证其特异性哦

一、引物数据库查找：

要设计一个mRNA的qPCR引物，首先应该先看看别人是否已经使用过，可以先在数据库PrimerBank中查找：https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/

1 首先我们要得到这个基因的Gene ID，我们在NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）数据库中查找（以IL-1β为例）：

（1）在 “Gene” 下输入要查找的目的基因，点击‘Search’。

（2）找到IL-1β（注意物种对不对），点击紫色链接打开（最好右击在新标签页打开链接）。

3）找到IL-1β的详细信息，IL-1β的Gene ID为3553。

2 打开PrimerBank网址：https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/

（4）按照下图将所需信息填入，点击submit。

（5）上图为submit后得到的结果，结果为Gene ID 3553的基因的详细信息，仔细再核对一遍；

（6）如下图所示，PrimerBank为我们找到的几条目的基因的qPCR引物，选择其中1-2条，并进行特异性验证。

3 再用NCBI 中的Primer-Blast检验引物的特异性。以查找到的第一条引物为例：

（7）打开https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/，将需要验证的上下游引物输入，调整参数如下图：

（8）其余参数保持不变。

（9）勾选Show results in a new window, 点击‘Get Primers’。

（10）得到验证结果如下图所示，再根据引物设计原则自行判断。