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细胞周期实验步骤、周期上机检测过程、周期分析教程(保姆级)
飞天小俊秀
2022年05月16日 00:04

周期实验步骤:

周期上机检测过程

周期分析教程:

1.       确定插入license.key 文件的U盘,打开Flowjo V10, 页面显示:Drag Samples Here

2.       将流式文件夹打开,选择所有样品 .fcs文件,拖入Flowjo

3.       选择Blank 样品进行处理

双击出现右侧界面

4.       将X轴Y轴分别改为FSC-A,SSC-A,通过T customize axis,将收集的细胞调节至合适的位置:

Scale 该为linear ,通过第二个减号将峰调至中间的位置

5.  圈门:除去碎片,同上机操作,为适应所有所有样品,建议尽量圈大。圈完门后产生Lymphocytes(门的名字默认,可改)子文件,直接将该文件拖至All Samples,将之前的处理应用到所有样本。

6.       双击圈出的门,弹出新的窗口,分别改XY轴为FL4-A:Y585-PE-A, FL4-A:Y585-PE-H,同样通过T,customize axis-lingear,并调至合适位置。

7.       圈门,同上机操作时。将Single cells拖至Lymphocytes,应用至所有,检查圈出的门是否适用所有样品。

8.       点击右上角太阳型Biology,选择第一个Cell cycle,改X为FL-4-A:Y585-PE-A,Model里还可以改不同的显示。处理完后将cell cycle文件拖至All Samples,应用到所有样品。

 

同时勾选G2 Peak中的CV=G1 CV,model中 Gates中勾选CC Gates in workspace

9.数据导出:

点击Table Editor新建样本个数的table,双击重命名,将每个样本对应的cell cycle 文件拖至table中:如右侧先选中Blank,再将左侧cell cycle 文件拖进去。