一分钟设计microRNA引物你信不信
第一步：到miRBase下载想要的miRNA序列：
进入http://www.mirbase.org，在右上角搜索框中输入想要的miRNA；
比如，这里我输入“hsa-miR-133a-3p”；
如果miRBase里面有这个条目会自动进入这个页面：
滑动页面，找到hsa-miR-133a-3p，注意这个页面同时有hsa-miR-133a-5p，不能选错！
点击序列下方 Get sequence 按钮，这样我们就获得了hsa-miR-133a-3p的成熟体序列 。
序列默认是FASTA格式，从5‘端到3’端排列
5‘ UUUGGUCCCCUUCAACCAGCUG 3’
第二步，打开下面的链接，下载设计软件：
进入http://www.vazyme.com/companyfile/7/，下载Vazyme miRNA引物设计软件；
下载后解压，双击运行miRNA Design V1.01，开始进行引物设计。
如果提示打开错误请看文末说明。
输入miRNA序列后点击设计引物，即可得到逆转录引物序列及qPCR引物序列
这里还是以“hsa-miR-133a-3p”为例实操一下：
复制③和④那一共3条引物序列，一起送公司合成，建议PAGE级别。
miRNA Design软件打不开的解决方法：
1. 在安装软件miRNA Design时，如果出现“Component 'RICHTX32.OCX' or one of its dependencies not correctly registered:a file is missing or invalid”错误(见下图)，说明系统文件Richtx32.ocx丢失或无效，导致无法注册，首先注册文件，该方法如下：
2. 查看系统类型。鼠标移至计算机，右键，选择属性，在弹出的窗口中查看系统类型(见下图)。
Win7系统界面
Win10系统界面
3. 如果是32位系统，将Richtx32.ocx（在文件夹里面）复制到C:\Windows\System32目录下；64位系统，Richtx32.ocx文件复制到C:\Windows\SysWow64 (见下图)
注意32位系统和64位系统目录名不一样
4. 用管理员身份进入cmd窗口。程序---附件---命令提示符（管理员身份进入）(见下图)
Win10系统可以点击放大镜按钮输入cmd，右侧选择“以管理员身份运行”
5. 输入命令。
32位系统，输入”regsvr32 richtx32.ocx";
64位系统，输入“cd c:\windows\SysWow64",回车，最后输入"regsvr32 richtx32.ocx"。(见下图)
32位系统
64位操作系统
6. 确认操作。成功注册系统会弹出："注册成功"提示框。(见下图)
7. 再去打开miRNA Design，即可。
