DNA聚合酶是PCR反应的核心组分，也是DNA复制过程中的关键酶，广泛应用于生物、医学等领域的众多研究方向。自PCR技术问世40多年来，从最初的Taq DNA聚合酶到如今，DNA聚合酶的种类愈发丰富。随着新酶的不断发现以及对旧酶的持续改造，DNA聚合酶在保真性、特异性、灵敏度等方面均取得了显著提升。高保真DNA聚合酶的诞生，正是为了满足日益增长的市场需求。接下来，本文将重点介绍高保真DNA聚合酶的作用原理及其应用方向。

什么是高保真酶

高保真DNA聚合酶有聚合中心和酶切中心，聚合中心具有5'→3'的DNA聚合酶活性，可沿 5'→3'方向催化合成 DNA；酶切中心具有3'→5'外切酶活性，可以进行碱基错配的修复。常见的高保真DNA聚合酶类型有Pfu、KOD等。

如何选择高保真酶

对于测序、基因功能研究、蛋白表达、定点突变等，高保真性的扩增是非常重要的，可以确保各种扩增子的可靠扩增。以测序文库扩增过程为例，测序过程中的突变会给序列拼接造成困难，甚至会干扰某些需要低频检测的分析结果。对于市场上琳琅满目的各种高保真DNA聚合酶，选择一款合适的酶产品是极为必要的。市面上常见的高保真酶特性主要包含保真度、扩增速率、特异性、是否耐U等。

保真度：错配率是计算高保真DNA聚合酶保真性的一个通用标准，错配率越低代表其保真性越好，保真度常用错配率的倒数表示（保真度=1/错配率），不同的测定方法也会产生不同的结果。常见的测定方法有以下三种：

扩增速率：合成能力是评估高保真DNA聚合酶非常重要的因素。原始的高保真DNA聚合酶因为具有较强的3'→5'外切酶活性，其合成能力较低。例如Pfu DNA聚合酶的合成速率还不到Taq DNA聚合酶的一半，但是Arcegen High-Fidelity DNA Polymerase，通过基因改造，聚合能力明显提升，扩增速率可至10 sec/kb。

特异性：PCR扩增由低温上升至高温的过程中，酶的弱活性极易造成错配或形成引物二聚体，这种非特异性扩增会显著降低产物质量。为了减少这种现象的发生，可以人为的在开始延伸之前不让酶发挥活性，以保证扩增的特异性，这种方式也被形容为酶的热启动。Arcegen High-Fidelity DNA Polymerase具备热启动特性，具有特异性高、灵敏性高、产量高的特点。

注：不同公司测定保真度的方法不同，产生的结果也不一样，酶的保真度必须采用同种方法下才能够相互比较。